کلون سازی و بررسی بیان ژن nlpD اسینتوباکتر بومانی در سلول های HDF انسان به روش RT-PCR
Authors
Abstract:
سابقه و هدف: اسینتوباکتر بومانی یکی از باکتری های بسیار مقاوم در برابر انواع آنتی بیوتیک ها در جهان است. این باکتری عامل عفونت های بیمارستانی به صورت بومی یا همه گیر بوده و هنوز واکسن موثری علیه آن وجود ندارد. NlpD یکی از عوامل آنتی ژنی مهم است که سبب تحریک سیستم ایمنی میزبان می گردد. بنابراین، هدف از این تحقیق، کلونسازی و بررسی بیان ژن nlpD باکتری اسینتوباکتر بومانی در سلول های HDF (Human dermal fibroblast) است. مواد و روش ها: در این تحقیق تجربی ژن nlpD از روی ژنوم اسینتوباکتر بومانی با استفاده از روش PCR تکثیر شد. سپس، ژن مذکور به ترتیب در ناقل های pTZ57R/T و pIRES2-EGFP کلونسازی و سابکلون گردید. تایید صحت کلون سازی ژن با سه روش PCR، آنزیم های برش دهنده و تعیین توالی مورد ارزیابی قرار گرفت. سپس، ناقل نوترکیب نهایی pIRES2-EGFP-nlpD با کمک الکتروپوریشن به سلول های HDF منتقل گردید و بیان ژن هدف در این سلول ها با روش RT-PCR بررسی شد. نتایج: قطعه 831 جفت بازی مربوط به ژن nlpD اسینتوباکتر بومانی با موفقیت تکثیر شد. هم چنین، نتایج تحقیق نشان داد که سازواره نهایی pIRES2-EGFP-nlpD تشکیل گریده است. مشاهده باند 831 جفت بازی پس از انجام RT-PCR، در سلول های ترانسفورم شده نسبت به سلول های شاهد، موید بیان ژن nlpD در سلول هایHDF می باشد. نتیجه گیری: سازواره نهایی ساخته شده در این تحقیق توان بیان ژن nlpD اسینتوباکتر بومانی را در سلول های یوکاریوتی دارد. بیان موفق ژن هدف می تواند در راستای بررسی ایمنی زایی در حیوانات آزمایشگاهی به عنوان یک واکسن نوترکیب مدنظر قرار گیرد. هم چنین، سازواره pIRES2-EGFP-nlpD از پتانسیل لازم برای بررسی به عنوان واکسن ژنی در تحقیقات آینده برخوردار است.
similar resources
بررسی بیان ژن lnT هلیکوباکتر پیلوری در سلول‌های HDF انسان به روش RT-PCR
Background and Objectives: Helicobacter pylori is a gram-negative and spiral bacterium that causes stomach and duodenal disease in humans. Because of the presence of disadvantages in antibiotic therapies, increasing efforts have been made to produce effective vaccine for this infection. The aim of this study was to generate a construct carrying the lnT gene and to survey its...
full textمطالعه بیان ژن ureI هلیکوباکترپیلوری به روش RT-PCR
سابقه و هدف: هلیکوباکترپیلوری یک ارگانیسم مارپیچی شکل و گرم منفی بوده که عامل زخم معده است و نقش مهمی در ایجاد سرطان معده دارد. اجزای مختلف اوره آز، از عوامل مهم برای تحریک سیستم ایمنی هستند. هنوز واکسن موثری علیه این باکتری وجود ندارد و تحقیقات در زمینه یافتن واکسن، ضروری به نظر می رسد. هدف از تحقیق حاضر، ایجاد سازواره ژنی بر اساس ژن ureI و بررسی بیان آن است. مواد و روشها: در این مطالعه تجربی...
full textبیان ژن leoA هلیکوباکترپیلوری در سلول‌های تخمدان همستر چینی به روش RT-PCR
زمینه و هدف : عفونت هلیکوباکترپیلوری یکی از شایع‌ترین عفونت‌های مزمن باکتریایی در جهان به‌ویژه در کشورهای در حال توسعه است. ژن leoA نقش مهمی در بیماری‌زایی ایفا می‌کند و نقش اصلی این ژن افزایش ترشح سم توسط باکتری است. این مطالعه به منظور جداسازی و کلونسازی ژن leoA در وکتور بیانی pEGFP-C2 و بررسی بیان آن به روش RT-PCR در سیستم یوکاریوتی انجام شد. روش بررسی : در این مطالعه توصیفی آزمایشگاهی ژن l...
full textبررسی میزان بیان تعدادی از ژنهای دخیل در سرطان در چند رده سلول سرطانی مختلف به روش RT-PCR
چکیده فرم تغییریافته و یا جهشیافته ژنها یا همان پروتو انکوژنها، مسئول ترویج رشد و تکثیر کنترلنشده سلولی میباشند. تجمع جهش در ژنهای مختلف و خاص، در طول زمان منجر به سرطان میشود. الگوی بیان ژن (امضا مولکولی)، برای هر کلاس از سلول‌های توموری اختصاصی است. این مقاله آخرین روش نظارت بر بیان یک پانل از ژنهای خاص سرطانی را شرح میدهد. روش real-time PCR براساس عملکرد کمی رنگ SYBR GReen، بهطور و...
full textبررسی فراوانی ژنهای بتالاکتاماز PER و VEB در اسینتوباکتر بومانی ایزوله شده از بیماران شهر تهران به روش مولکولی PCR
زمینه و اهداف: با توجه به اهمیت گزارش‌های فراوان از عفونت‌های ناشی از اسینتوباکتر بومانی مولد بتالاکتامازهای وسیع الطیف در سال‌های اخیر در کشورمان، این مطالعه باهدف تعیین مقاومت پادزیستی و تعیین فراوانی ژنهای کد کننده ی بتالاکتامازهای PERو VEB در ایزوله ی اسینتوباکتر بومانی از بیماران بیمارستانهای تهران با روش PCR انجام شد. مواد و روش کار: 100 ایزوله ی بالینی اسینتوباکتر بومانی جمع آوری شده ...
full textمطالعه مولکولی همزمان ژن های پلاسمیدی Ampc اسینتوباکتر بومانی جدا شده از مواردبالینی با روش Multiplex_PCR
Background and purpose: Acinetobacter baumannii is an opportunistic pathogen that remains persistent in the environment for a long time. The eradication of this bacteria is difficult, since it has the ability to acquire antibiotic resistance. The aims of this study were to identify the ampC plasmid-mediated genes and antibiotic sensitivity of Acinetobacter baumannii strains. Materials and meth...
full textMy Resources
Journal title
volume 21 issue 4
pages 359- 366
publication date 2017-10
By following a journal you will be notified via email when a new issue of this journal is published.
No Keywords
Hosted on Doprax cloud platform doprax.com
copyright © 2015-2023